輔基包括底物和什么

輔酶。

由于輔酶在酶催化反應(yīng)中其化學(xué)組分發(fā)生了變化，因此可以認(rèn)為輔酶是一種特殊的底物或者稱為“第二底物”。

輔基與酶不能分開。酶失去了輔基就無法實(shí)現(xiàn)它的功能，失去了活性。離開了酶輔基也無法單獨(dú)存在。底物純粹是酶催化反應(yīng)的反應(yīng)物。

酶和酶作用底物

（一）酶的要求：

一個(gè)酶蛋白分子每分鐘可催化10 3 ～10 4 個(gè)底物分子轉(zhuǎn)變成有色產(chǎn)物。用于標(biāo)記的酶應(yīng)符合：

1.酶的活性要強(qiáng)，催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，***高。

2.酶催化底物后產(chǎn)生的產(chǎn)物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復(fù)性好。

3.作用專一性強(qiáng) ，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢組織或體液中不存在與標(biāo)記酶相同的內(nèi)源性酶或抑制物。用于均相酶免疫測定的酶還要求當(dāng)抗體與酶標(biāo)抗原結(jié)合后，酶活性可出現(xiàn)抑制或激活。

4.易與抗體或抗原偶聯(lián) ，標(biāo)記后酶活性保持穩(wěn)定，且不影響 標(biāo)記抗原與抗體的免疫反應(yīng)性 。

5.酶、輔助因子及其底物對人體無害 ，酶的底物易于配制、保存，酶及其底物應(yīng)價(jià)廉易得。

（二）常用的酶

1.辣根過氧化物酶（HRP）：

目前酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛 的標(biāo)記用酶。

由無色的糖蛋白(主酶)和亞鐵血紅蛋白(輔基)結(jié)合而成的復(fù)合物。

輔基是酶活性基團(tuán) ，而主酶則與酶活性無關(guān) ，HRP的***用RZ(HRP分別在403nm和275nm處的吸光度比值)表示，RZ值應(yīng)大于3.0 。

RZ值僅說明血紅素基團(tuán)在HRP中的含量 ，并非表示HRP制劑的真正***，而且RZ值高的HRP并不意味著酶活性也高，RZ值與酶活性無關(guān) 。

酶活性以單位U表示： 即1分鐘將1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量。酶變性后，RZ值不變但活性降低 ，因此使用酶制劑時(shí)，酶活性單位比RZ值更為重要。

輔基 輔基(prosthetic group) 酶的輔因子或結(jié)合蛋白質(zhì)的非蛋白部分，與酶或蛋白質(zhì)結(jié)合的非常緊密，用透析法不能除去。按照化學(xué)組成，酶可以分為 簡單蛋白質(zhì) 和 結(jié)合蛋白質(zhì) 兩大類。胃蛋白酶、核糖核酸酶等一般水解酶屬于簡單蛋白質(zhì)，這些酶只由氨基酸組成，此外不含其它成分。轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶及其他氧化還原酶等均屬于結(jié)合蛋白質(zhì)。這些酶除了蛋白質(zhì)組分外，還含有一對熱穩(wěn)定的非蛋白的小分子物質(zhì)，前者稱為酶蛋白，后者稱為輔因子。酶蛋白與輔因子單獨(dú)存在時(shí)，一般無催化能力，只有二者結(jié)合成完整的分子時(shí)，才具有活力，此完整的酶分子稱為全酶。 因此生物體內(nèi)有些蛋白由蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩部分組成。其中較小的非蛋白質(zhì)部分稱輔基。如全酶包括酶蛋白質(zhì)和輔基（或輔酶）二部分，輔基與酶蛋白結(jié)合較牢固。輔基可以是有機(jī)化合物，如糖類、脂肪和核酸；也可以是金屬離子或金屬配位化合物，如銅（Ⅱ）是銅藍(lán)蛋白的輔基，血紅素是血紅蛋白的輔基等。 因?yàn)檩o基是與酶蛋白共價(jià)結(jié)合的金屬離子或一類有機(jī)化合物，所以用透析法不能除去。輔基在整個(gè)酶促反應(yīng)過程中始終與酶的特定部位結(jié)合。 例如細(xì)胞色素氧化酶的鐵卟啉。